Genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Chile / Diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores do Chile

Abstract This study aimed to investigate the genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Valdivia, Chile. A total of 74 rodents (synanthropic n=38; wild n=36) were trapped in Valdivia. We performed conventional PCR assays for Apicomplexa organisms targeting two overlapping 18S rDNA gene fragments (600 bp and 900 bp) followed by sequencing of selected amplicons. Hepatozoon spp. occurrence was 82.43% (61/74). Twelve sequences obtained from the 600 bp and ten from the 900 bp 18S rDNA fragments were identified as Hepatozoon sp. Six sequences obtained from 18S rDNA-based overlapping PCR protocols were used for concatenated (1,400 bp) phylogenetic, haplotype and distance analyses. Hepatozoon spp. 18S rDNA concatenated sequences from the present study were detected in Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus, and Abrothrix longipilis grouped with Hepatozoon species earlier described in rodents and reptiles from Chile and Brazil. Nucleotide polymorphism of the six 18S rDNA sequences (1,400 bp) from this study, and other Chilean sequences from rodents and rodent's ticks, showed high diversity with a total of nine Chilean haplotypes. Three haplotypes from Valdivia were identified for the first time in this study, suggesting the circulation of novel haplotypes in rodents from southern Chile.

Resumo Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores de Valdivia, Chile. Um total de 74 roedores (sinantrópicos n=38; selvagens n=36) foram capturados. PCR convencional foi realizada para organismos Apicomplexa, visando dois fragmentos sobrepostos do gene 18S rDNA (600 bp e 900 bp), seguida pelo sequenciamento de amplicons selecionados. A ocorrência de Hepatozoon spp. foi de 82,43% (61/74). Doze sequências obtidas dos fragmentos de 18S rDNA de 600 pb e dez dos fragmentos de 18S rDNA de 900 pb foram identificadas como Hepatozoon sp. Seis sequências obtidas, a partir de protocolos de PCR sobrepostos, foram usadas para análises filogenéticas (1.400 bp), de haplótipos e de distância. Sequências concatenadas 18S rDNA do presente estudo foram detectadas em Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus e Abrothrix longipilis e agrupadas com Hepatozoon descrito em roedores e répteis do Chile e do Brasil. A análise de polimorfismos das seis sequências deste estudo, junto com outras sequências chilenas de roedores e carrapatos de roedores, mostrou alta diversidade com um total de nove haplótipos no Chile. Três haplótipos detectados em Valdivia foram identificados pela primeira vez neste estudo, sugerindo que novos haplótipos circulam em roedores do sul do Chile.

Hematological, clinical and epidemiological aspects of Hepatozoon canis infection by parasitological detection in dogs from the rural area of Sousa, Paraíba, Brazil / Aspectos hematológicos, clínicos e epidemiológicos da infecção por Hepatozoon canis por detecção parasitológica em cães da zona rural de Sousa, Paraíba, Brasil

ABSTRACT: Hepatozoonosis is caused by protozoa of the genus Hepatozoon. In dogs, the infection is caused mainly by Hepatozoon canis, and there are a few descriptions of the prevalence of this infection in the Northeast region of Brazil, especially in the semi-arid region. Therefore, we aimed to determine the prevalence of Hepatozoon canis infection in dogs in the rural area of ​​Sousa, Paraíba, Brazil, as well as to determine the possible clinical and epidemiological aspects of this infection. Ninety-eight dogs in the rural zone of the municipality of Sousa that were at least 4 months old were evaluated, regardless of their breed or gender. Clinical examinations were carried out, and samples of systemic and peripheral blood were collected to determine the presence of the parasite in blood smears and carry out hemograms. In addition, epidemiological questionnaires about animal health and food management were completed. The prevalence of H. canis infections in dogs was 8.1% (8/98). There were three main changes in the hematological status: thrombocytopenia, anemia and hyperproteinemia, mainly related to percentage of leukocyte infection ≥5%, and also to the presence of clinical signs such as mucopurulent secretion, lymphadenomegaly, dry skin, pale mucous membranes, and lean or cachectic body score.

RESUMO: A hepatozoonose é causada por protozoários do gênero Hepatozoon. Em cães, a infecção ocorre principalmente por Hepatozoon canis, sendo escassas as descrições de prevalências desta infecção na região Nordeste do Brasil, sobretudo no Semiárido. Com isso, o trabalho objetivou determinar a prevalência da infecção por Hepatozoon canis em cães da zona rural do município de Sousa, Paraíba, Brasil, como também determinar possíveis sinais clínicos e aspectos epidemiológicos relacionados à esta infecção. Foram avaliados 98 cães da zona rural do município de Sousa, independentemente da raça ou sexo, com idade superior a quatro meses. Foram realizados exames clínicos e colhidas amostras de sangue sistêmico e periférico para a pesquisa do parasito em esfregaços sanguíneos e hemogramas. Além disso, foram preenchidos questionários epidemiológicos acerca do manejo sanitário e alimentar dos animais. A prevalência de cães positivos para H. canis foi de 8,1% (8/98). Foram observados três principais alterações no quadro hematológico, sendo trombocitopenia, anemia e hiperproteinemia, principalmente relacionadas ao percentual de leucócitos infectados ≥ 5%, e também à presença de sinais clínicos, como secreção mucopurulenta, linfadenomegalia, pelos ressecados, mucosas hipocoradas e escore corporal magro ou caquético.

Hepatozoon sp. gamonts as an accidental finding in synovial liquid from an injured maned wolf (Chrysocyon brachyurus) in southeastern Brazil / Gamontes de Hepatozoon sp. como achado acidental em líquido sinovial de lobo guará (Chrysocyon brachyurus) no sudeste do Brasil

Abstract A free-living, adult male maned wolf (Chrysocyon brachyurus) was referred to the Governador "Laudo Natel" - FCAV/Unesp veterinary hospital after being found with skin lesions and a fracture on the right pelvic limb, which had to be amputated due to compromised integrity. Around 20 days later, bilateral accentuated swollen on humerus-radius-ulna articulation was observed. The synovial liquid was drained and sent to the laboratory for synovial cytology with Rosenfeld staining that revealed predominantly degenerated neutrophils with karyolytic chromatin associated with intracellular inclusions suggestive of Hepatozoon sp. gametocytes. Blood and synovial liquid samples were submitted to molecular analysis, aiming to amplify the Hepatozoon spp. 18S rRNA gene fragment. Despite the positioning of the found Hepatozoon sequence together with Hepatozoon canis previously detected in domestic carnivores, the BLAST analysis showed only 98% identity with H. canis. To the best of the authors' knowledge, this is the first time a Hepatozoon was detected in the synovial liquid by clinical pathology and molecular analyses.

Resumo Um lobo guará (Chrysocyon brachyurus) adulto, macho, de vida livre foi encaminhado para atendimento no hospital veterinário Governador "Laudo Natel" - FCAV/Unesp após ser encontrado com lesões de pele e fratura em membro pélvico direito, sendo amputado devido a comprometimento da integridade do membro. Aproximadamente 20 dias após a chegada ao hospital, foi notado acentuado aumento de volume bilateral em região de articulação úmero-rádio-ulnar. O líquido sinovial foi drenado e enviado para análise citológica com coloração de Rosenfeld, revelando a presença de neutrófilos degenerados com cromatina cariolítica associados a inclusões intracelulares sugestivas de gametócitos de Hepatozoon sp. Amostras de sangue e líquido sinovial foram submetidas a análises moleculares visando amplificar um fragmento do gene 18S rRNA de Hepatozoon spp. Apesar da sequência de Hepatozoon detectada se posicionar filogeneticamente no mesmo clado que H. canis previamente detectado em carnívoros domésticos, o resultado da análise do BLAST mostrou somente 98% de identidade com H. canis. De acordo com o conhecimento dos autores, esta é a primeira vez que Hepatozoon foi detectado no líquido sinovial por meio de patologia clínica e análises moleculares.

First Case of Canine Infection with Hepatozoon canis (Apicomplexa: Haemogregarinidae) in the Republic of Korea

This report describes a dog infected with Hepatozoon canis, the first canine infection in the Republic of Korea. A 2-year-old intact male Maltese dog presented with anorexia and depression. Physical examinations revealed mild dehydration and hyperthermia (39.8°C), and blood analysis showed pancytopenia. Diff-Quik staining of blood smear specimens showed the presence of ellipsoidal shaped structures (gamonts of H. canis) within a small number of neutrophils. Real-time PCR analysis using whole blood confirmed infection by H. canis. The clinical condition of the dog improved after symptomatic treatment and administration of doxycycline. Although a molecular epidemiologic survey in Korea showed H. canis infection of dogs, to our knowledge this is the first report of a dog infection in Korea molecularly shown to be H. canis.

Molecular diagnosis of Hepatozoon canis in symptomatic dogs in the city of Goiania, Goiás, Brazil / Diagnóstico molecular de Hepatozoon canis em cães sintomáticos do município de Goiânia, Goiás, Brasil

More than 300 species have been described in the genus Hepatozoon, occurring in different vertebrates. Among these, only Hepatozoon canis and Hepatozoon americanum are seen in dogs. Different methods may be used for laboratory diagnosis. The most common of these is direct parasitological examination of parasite stages in blood smears. The aim of this investigation was to conduct a phylogenetic study on Hepatozoon isolates from symptomatic dogs in the city of Goiânia, Goiás, Brazil. Blood samples were obtained from 40 symptomatic dogs that had been referred to the Veterinary Hospital of the Federal University of Goiás. Among these, only two samples were positive for Hepatozoon spp. using the direct parasitological method. These samples were then subjected to a DNA extraction process and amplification of a fragment of the 18S rRNA by means of PCR. Subsequently, the PCR products from each sample were purified and sequenced. The sequences obtained were then analyzed using the BLASTn algorithm, which identified both sequences of this study as Hepatozoon canis. By applying the Mega4 software, it was confirmed that these isolates of H. canis from dogs in Goiânia are similar to other reference isolates of the same species from other regions of Brazil and worldwide.(AU)

São descritas mais de 300 espécies do gênero Hepatozoon que acometem diferentes vertebrados. Entre estas, apenas Hepatozoon canis e Hepatozoon americanum são descritas em cães. Diferentes métodos podem ser utilizados para o diagnóstico laboratorial. O mais empregado é o exame parasitológico direto do parasito em esfregaços sanguíneos. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo filogenético em Hepatozoon isolados de cães sintomáticos de Goiânia, Goiás. As amostras de sangue foram obtidas de 40 cães sintomáticos encaminhados ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás. Entre essas, duas únicas amostras foram positivas para Hepatozoon spp. pelo método parasitológico direto. Estas amostras foram, então, submetidas ao processo de extração de DNA e de amplificação de um fragmento de 18S rRNA por PCR. Ambas as amostras foram positivas na PCR. Posteriormente, os produtos de PCR de cada amostra foram purificados e sequenciados. As sequências obtidas foram analisadas pelo algoritmo BLASTn, sendo identificadas como Hepatozoon canis. Por meio do software Mega4 foi confirmado que estes isolados de H. canis de cães de Goiânia são semelhantes a outros isolados de referência da mesma espécie de outras regiões do Brasil e do mundo.(AU)

Hepatozoon canis and Leishmania spp. coinfection in dogs diagnosed with visceral leishmaniasis / Coinfecção com Hepatozoon canis e Leishmania spp. em cães diagnosticados com leishmaniose visceral

Abstract This study describes the occurrence of dogs naturally co-infected with Hepatozoon canis and two Leishmania species: L. infantum or L. braziliensis. Four dogs serologically diagnosed with Visceral Leishmaniasis were euthanized. Liver and spleen samples were collected for histopathological analysis and DNA isolation. H. canis meronts were observed in tissues from all four dogs. H. canis infection was confirmed by PCR followed by sequencing of a fragment of 18S rRNA gene. Leishmania detection and typing was confirmed by ITS1' PCR-RFLP and parasite burden was calculated using ssrRNA quantitative qPCR. A DPP - Dual Path platform test was performed. One out (Dog #2) of four animals was asymptomatic. Dogs #1 and #4 were infected by L. infantum and were DPP test positive. Dogs #2 and #3 were infected by L. braziliensis and were DPP test negative. Furthermore, visceral dissemination was observed in Dogs #2 and #3, since L. braziliensis was detected in liver and spleen samples. The visceral dissemination of L. braziliensis associated with systemic signs suggested that this co-infection could influence the parasite burden and disease progression.

Resumo O presente estudo descreve a ocorrência de coinfecção com Hepatozoon canis e duas espécies de Leishmania (L. infantum ou L. braziliensis) em cães. Quatro cães sorologicamente diagnosticados com leishmaniose visceral foram eutanasiados. Amostras do baço e fígado foram submetidas à histopatologia e extração de DNA. Merontes de H. canis foram observados nos quatro cães. A infecção por H. canis foi confirmada por PCR e sequenciamento de um fragmento do gene 18S rRNA. A infecção por Leishmania e tipagem foram realizadas por PCR-RFLP do região intergênica ITS1. A carga parasitária foi calculada pela qPCR quantitativa baseada no gene ssrRNA. O teste DPP - Dual Path platform foi realizado. Apenas o Cão #2 era assintomático. Os cães #1 e #4 estavam infectados com L. infantum e foram positivos no DPP. Os cães #2 e #3 estavam infectados com L. braziliensis e foram negativos no DPP. Além disso, visceralização foi observada nos cães #2 e #3, nos quais L. braziliensis foi detectada em amostras de baço e fígado. A visceralização da L. braziliensis associada a sinais clínicos sistêmicos sugerem que esta coinfecção pode ter influenciado na carga parasitária e progressão da doença.

Hallazgo de Hepatozoon y otros hemotrópicos en caninos domésticos del municipio Sucre, estado Sucre, Venezuela / First discovery of Hepatozoon and other hemotropics in canine domestic of the Sucre municipality, Sucre State, Venezuela

Los hemotrópicos son entidades patológicas que afectan a caninos domésticos y salvajes, así como a humanos; su distribución geográfica es mundial. Con el objetivo de determinar la prevalencia de hemotrópicos en caninos domésticos de las comunidades Cancamure II, Guaranache I y Vega El Limón, de la parroquia San Juan, municipio Sucre, estado Sucre, Venezuela, se tomaron muestras sanguíneas a 65 caninos, de todas las edades, sin distinción de raza ni sexo, previo consentimiento informado de sus propietarios. Para el diagnóstico parasitológico se utilizó el examen directo, extendidos sanguíneos y de capa blanca teñidos con Hemacolor®, también se empleó la técnica de concentración de Knott modificada. De los 65 caninos estudiados, 39 resultaron positivos para hemotrópicos, representando una prevalencia de 60,00%. Entre los hemotrópicos encontrados, Ehrlichia canis resultó ser la especie más común en los caninos con una prevalencia de 89,70%, seguido por Anaplasma platys (10,20%), Dirofilaria immitis (7,70%) y Hepatozoon canis (2,60%). La comunidad más afectada por Ehrlichia canis fue Guaranache I con el 48,60% de los casos. Los valores hematológicos concordaron con lo esperado para cada hemotrópico; en el caso particular de la hepatozoonosis, el canino presentó una leucocitosis de 18,3x10(9)/L y linfocitosis leve (53,80%); sin embargo, no presentó ningún signo patognomónico. La elevada prevalencia de Ehrlichia canis en estas comunidades representa un riesgo epidemiológico para la población canina y las personas de estas comunidades. El hallazgo de Hepatozoon canis representa un importante aporte epidemiológico de la enfermedad en el municipio Sucre, siendo este el primer caso reportado en el oriente venezolano.

Hemotropics are pathogens that affect domestic and wild dogs as well as humans worldwide. In this study we determined the prevalence of hemotropics in domestic dogs in the Cancamure II, Vega El Limón and Guaranache communities in the parish of San Juan, Sucre Municipality, Sucre state, Venezuela. Blood samples of 65 dogs of all ages, regardless of race or sex, were collected with the informed consent of their owners. Parasitological diagnosis was performed using direct examination, as well as blood and buffy coat smears stained with Hemacolor®. The modified Knott´s concentration technique was also used. Of the 65 dogs studied 39 (60%) tested positive for hemotropics, and of these Ehrlichia canis was the most common species with a prevalence of 89.7%, followed by Anaplasma platys (10.2%), Dirofilaria immitis (7.7%) and Hepatozoon canis (2.6%). The community most affected by Ehrlichia canis was Guaranache with 48.6% of the total number of cases. Hematologic values were consistent with expected values for each hemotropic. As regards the hepatozoonosis, the dog showed a leukocytosis of 18.3x10(9)/L and mild lymphocytosis (53.8%), but did not show any pathognomonic symptoms. The high prevalence of Ehrlichia canis in these communities represents an epidemiological risk both for the dog populations and human inhabitants. The presence of Hepatozoon canis also represents an important contribution to the epidemiology of hepatozoonosis in Sucre Municipality, as this is the first report of this disease in eastern Venezuela.

Hepatozoonose canina em Campos dos Goytacazes, RJ / Canine hepatozoonosis in Campos dos Goytacazes, RJ / Hepatozoonosis canina en campos dos Goytacazes, RJ

A hepatozoonose canina é mais comumente causada pelos protozoários Hepatozoon canis e H. americanum. No Brasil, esta doença é transmitida pelos carrapatos Rhipicephalus sanguineus e Amblyomma spp., através da ingestão do vetor infectado. A doença já foi diagnosticada em vários estados brasileiros, inclusive no Rio de Janeiro, e pela primeira vez nesta cidade. Este artigo relata um caso de hepatozoonose em uma cadela da raça Rotweiller, de dois anos de idade, que foi tratada e teve melhora clínica. As alterações clínicas e hematológicas foram apatia, inapetência, pirexia, anemia regenerativa, desvio nuclear de neutrófilos acentuado e trombocitopenia.

Canine hepatozoonosis is commonly caused by the protozoans Hepatozoon canis and H. americanum. In Brazil, this disease is transmitted by the ticks Rhipicephalus sanguineus and Amblyomma spp., when the dog ingests the infected tick. The disease was already diagnosed in several Brazilian states, including Rio de Janeiro, and for the first time in this city. This article shows a case of canine hepatozoonosis of a two year-old female dog of the race Rottweiler which was treated and presented clinical improvement. The clinical and hematological changes were apathy, lack of appetite, fever, anemia, nuclear deviation of the neutrophils and thrombocytopenia.

La hepatozoonosis canina es más causada por los protozoarios Hepatozoon canis y Hepatozoon americanum. En Brasil, esta enfermedad es transmitida por los garrapatos Rhipicephalus sanguineus y Amblyomma spp., a través de la ingestión del vector infectado. La enfermedad fue diagnosticada en varios estados brasileños, incluso en Rio de Janeiro, y por primera vez en esta ciudad. Este estudio relata un caso de hepatozoonosis en una perra de dos años de edad de la raza Rotweiller, que fue tratada y tuvo una mejora clínica. Las alteraciones clínicas y hematológicas fueron apatía, inapetencia, fiebre, anemia regenerativa, desvío nuclear de neutrófilos acentuado y trombocitopenía.